Новости онкологии

16.11.2016

Определение перестроек гена ALK у 4002 российских больных:
эффективность различных диагностических методов

Введение

Определение ряда генетических аберраций, потенциально чувствительных к терапии таргетными препаратами, предложено в качестве обязательной процедуры современными рекомендациями по диагностике и лечению онкологических заболеваний. Одним из таких является выявление перестроек гена киназы анапластической лимфомы (ALK) у больных немелкоклеточным раком легкого (НМРЛ). Из общепризнанных методов, используемых для обнаружения реарранжировок ALK, выделяют флюоресцентную гибридизацию in situ (FISH) и иммуногистохимическое исследование (ИГХ), позволяющее выявить экспрессию химерного протеина в цитоплазме опухолевых клеток. Несмотря на это, выбор наиболее специфичного, чувствительного и экономически обоснованного метода, рассчитанного на проведение массового скрининга больных НМРЛ, до сих пор вызывает затруднение у специалистов.

Материалы и методы

Выявление перестроек гена ALK было выполнено на 4002 биопсийном материале, фиксированном в формалине и залитом в парафин, который был взят у российских больных НМРЛ. Для обнаружения реарранжировок ALK использовали метод FISH (2334 образцов) и ИГХ/FISH (1546 образцов) при положительных или сомнительных результатах. Перекрестная проверка была проведена вслепую на 122 образцах. В случае получения сомнительных результатов после ИГХ/FISH метода, образцы анализировались на наличие несбалансированной экспрессии 5′/3′-концевых последовательностей гена ALK. Помимо этого поиск транслокаций ALK проводился путем аллель-специфической ПЦР в режиме реального времени.

Результаты

В сравнении с FISH, чувствительность и специфичность ИГХ составила 100% и 99%, соответственно. Это явилось основанием считать, что выполнение ИГХ на этапе скрининга было полностью оправданным. Реарранжировка ALK была выявлена в 7.8% образцах методом FISH и 6.6% образцах методом ИГХ/FISH, с преимущественным обнаружением у женщин, некурящих больных и лиц моложе 60 лет. В сомнительных случаях (13.4%) при использовании FISH после ИГХ был выявлен положительный результат (10 больных). В 7 случаях (0.5% от общей группы), остающихся сомнительными после ИГХ/FISH, результаты были перепроверены, и в 4-х действительно оценены как сомнительные. Метод ПЦР позволил выявить химерный транскрипт в ИГХ-/FISH+ и ИГХ+/FISH образцах, в то время как в 2-х ИГХ+/FISH- образцах его выявить не удалось.

Вывод

Полученные результаты свидетельствуют об эффективности использования двойного метода верификации ALK в потенциально сложных случаях. Более того, он разрешает результаты, остающиеся сомнительными после применения ИГХ, без существенного увеличения стоимости диагностики. Оценку противоречивых ситуаций необходимо проводить с целью улучшения наших знаний об ALK, и ее следует включить в список стандартных диагностических процедур, проводимых в клиниках.

Источник: Demidova, Irina et al. Detection of ALK rearrangements in 4002 Russian patients: The utility of different diagnostic approaches. Lung Cancer. November 2016, doi: 10.1016/j.lungcan.2016.11.001