Материалы конгрессов и конференций

Герминогенные опухоли яичка: происхождение и развитие

И.У. Оостерхуис, М.К. Мостерт, Л.Х.И. Лоойенга,
Роттердам, Нидерланды


Опухоли половых клеток человека представляют собой гетерогенную группу новообразований, происходящих, по-видимому, из примордиальных половых клеток. Они в основном встречаются в гонадах, но могут также образовываться и в определенных внегонадных сайтах. Такая локализация объясняется миграционными путями примордиальных половых клеток, которые образуясь в энтодерме желточного мешка 4-х недельных эмбрионов, мигрируют вдоль дорзального мезентерия в область генитальной складки. У мужчин герминогенные опухоли могут развиваться как в яичке, так и крестцово-копчиковом отделе, забрюшинном пространстве, а также в средостенье (Mostofi 1998; Scully 1979 ). У подростков и взрослых (включая лиц старшего возраста) герминогенные опухоли в основном образуются в яичке, в то время как у новорожденных и детей младшего возраста их главным образом обнаруживают в крестцовом отделе, основнм месте локализации данного типа опухолей у женщин.

На основании данных гистологии, возраста пациента, а также биологии опухолей все герминогенные опухоли яичка могут быть разделены на три группы (клинико-морфологические категории) (Oosterhuis, Looijenga, et al., 1997):

  • Герминогенные опухоли новорожденных и детей младшего возраста (GCTI): тератомы и опухоли желточного мешка
  • Герминогенные опухоли подростков и юношей (TGCT): семиномы и несеминомные опухоли
  • Герминогенные опухоли пожилых (SS): сперматоцитные семиномы

В следующих параграфах будут рассмотрены основные характеристики данных групп, а также современные взгляды на их генетические взаимоотношения.

Герминогенные опухоли яичка новорожденных и детей младшего возраста (GCTI).

GCTI обнаруживаются в раннем детском возрасте с частотой 0.12 на 100.000 (Looijenga 1999). В большинстве случаев они возникают во внегонадных сайтах, преимущественно, в крестцовом отделе (45%), и в редких случаях в яичке (6%). Гистологически GCTI представляют собой тератомы, или опухоли желточного мешка. Тератомы (TE) являются доброкачественными опухолями и поэтому в качестве лечения может применяться лишь орхиэктомия. Опухоли желточного мешка возникают чаще, чем TE (4 : 1) (Harms and Janig 1986), являются злокачественными, и их лечение может потребовать проведения дополнительной химиотерапии.

В отличии от ситуации с герминогенными опухолями яичка подростков и взрослых (TGCT; см. ниже), для которых показано, что их предшественниками являются внутриэпителиальные карциномы (carcinoma in situ, CIS) (Skakkebaek et al., 1987), в данном случае убедительных доказательств о связи GCTI с CIS не имеется. Герминогенные опухоли крестцово-копчикового отдела обычно представляют собой крупные доброкачественные тератомы, появляющиеся вскоре после рождения и отмечающиеся чаще всего у лиц женского пола. Дети в возрасте стрше 6-и лет имеют больший риск развития злокачественной опухоли желточного мешка как из предшествующей тератомы, так и на месте не полностью удаленной тератомы (Perlman et al., 1994).

Методом проточной цитометрии было показано, что тератомы в основном диплоидны (Silver et al., 1994; Stock et al., 1995; Hoffner et al., 1994), в то время как опухоли желточного мешка могут быть анеуплоидными, в большинстве случаев - почти тетраплоидными (Oosterhuis et al., 1989; Kommoss et al., 1990; Perlman, Cushing et al., 1994; Jendery et al., 1995). Разница в плоидности была подтверждена цитогенетически: FISH-анализ и кариотипирование показали отсутствие хромосомных аберраций в тератомах и наличие значительных аберраций хромосом в опухолях желточного мешка. Связано ли отсутствие хромосомных аберраций в тератомах с потерей опухолевых клеток в процессе культивирования, пока не известно. Кариотипирование опухолей желточного мешка выявило аномалии в коротком плече хромосомы 1 (частичная потеря района p36), длинном плече хромосомы 6, а также аномалии в районе 3p (Kaplan et al., 1979; Oosterhuis et al., 1988; Oosterhuis et al., 1993; Hoffner, Deka et al., 1994; Perlman, Cushing et al., 1994; Bussey et al., 1999). FISH-анализ клеток опухолей желточного мешка подтвердил наличие аберраций в хромосоме 1, а так же показал изменение числа копий для хромосом 8, 10, 12, 17 и X (Hu 1992; Stock et al., 1994; Jenderny, Koester et al., 1995; Perlman et al., 1996).

Недавно опухоли желточного мешка из семенников детей раннего возраста были проанализированы с помощью CGH-технологии. Несмотря на то, что число проанализированных случаев было невелико, в них была выявлена сходная картина хромосомного дисбаланса (вовлеченные районы помещены в скобки). Во всех случаях была выявлена потеря части хромосомного материала областей 4q(23-33) и 6q(16-22), в сочетании с приобретением материала в области 20q. По крайней мере в трех случаях выявлены : потери части хромосомного материала в области 1p(21-31) в сочетании с приобретением хромосомного материала в областях 3p(22-24), 9q(34), 12p(12-13), 17q(22-25), 19q(13) и 22(13).

Кроме четырех опухолей желточного мешка нами были обследованы случаи прогрессии крестцовых тератом в опухоли желточного мешка. Выявленная картина хромосомных аберраций была очень сходна с таковой для опухолей яичка. Эти данные хорошо согласуются с более ранними кариотипическими исследованиями (Perlman, Cushing et al., 1994; Bussey, Lawce et al., 1999) и указывают на то, что генетическая конституция этих опухолей в большей степени определяется гистологией, а не анатомической локализацией.

В одном случае опухоли желточного мешка был показан высокий уровень амплификации района 12q12-q14 области, как известно, содержащей ген MDM2. Известно также, что MDM2 образует комплекс с P53, приводя к ингибированию функции последнего (Haupt et al., 1997; Lane and Hall 1997; Midgley and Lane 1997). В связи с этим, используя иммуногистохимический подход, мы исследовали наличие в данных опухолях MDM2 и P53. Наши данные показали, что в опухолях желточного мешка и тератомах продуцируются MDM2, в то время как продуктов гена P53 обнаружено не было. Соответственно, в этих опухолях не было обнаружено мутаций в экзонах 5-8 гена P53. Эти данные показывают, что инактивация гена P53 в этих опухолях происходит не на генетическом, а на биохимическом уровне (Prives 1998).

Поскольку в хромосомные аберрации в тератомах обнаружены не были, наши данные не дают новых сведений о возможных взаимоотношениях между опухолями желточного мешка и тератомами. Предположение о том, что тератомы могут прогрессировать в опухоли желточного мешка, сделанное на основании исследования крестцовых тератом (Gonzalez-Crussi 1982), нуждаетс в дальнейшем подтвердении с использованием животных моделей (Van Berlo et al., 1990).

Герминогенные опухоли яичка у подростков и взрослых (TGCT)

Гистология, клиническая характеристика и модели прогрессии

Клинически и морфологически TGCT могут быть разделены на два типа : семиномы (SE) и несеминомы (NS). SE обычно проявляются у мужчин в возрасте 35-и лет, в то время как NS как правило проявляется лет на десять раньше. SE состоят из неопластических аналогов первичных половых ктеток. NS могут состоять из эмбриональных тканей (эмбриональная карцинома, незрелая и зрелая тератома) и/или внеэмбриональных тканей (опухоль желточного мешка и хориокарцинома). Из всех TGCT, 40% составляют NS, и 50% - SE. Остальные TGCT состоят из компонентов обоих типов опухолей и классифицируются согласно Британской классификации как смешанные опухоли (CT), или как NS согласно классификации ВОЗ (Mostofi, 1998).

SE обычно менее агрессивны по сравнению с NS, хотя агрессивность последних зависит от гистологического подпипа. Общий уровень вылечиваемости пациентов с TGCT высок, но до сих пор 10% больных умирает от данной болезни. Процент смертности может быть снижен применением интенсивного лечения. До настоящего времени не существует надежных факторов, способных предсказать результаты лечения (Bokemeyer and Schmoll 1995).

Считается, что общим предшественником SE и NS являются CIS (Skakkebaek, Berthelsen et al., 1987), состоящие из интратубулярных раковых клеток, напоминающих клетки SE. Экстраполяции основанные на наблюдениях пациентов с диагнозом CIS без инвазивного TGCT показывают, что CIS всегда прогрессирует в инвазивные TGCT (Giwercman et al., 1993; Burke and Mostofi 1988; Dieckmann and Loy 1993). Первоначальная экспансия CIS клеток обнаруживается как интратубулярная или микроинвазивная семинома.

Существуют две основные модели развития CIS в TGCT. Согласно одной различные гистологические варианты TGCT возникают независимо (Sesterhenn 1985), в то время как другая модель предполагает, что SE является промежуточной стадией между CIS и различными несеминомными опухолями (Oosterhuis et al., 1989; Oliver 1987). Цитогенетические исследования, показавшие наличие одинаковых хромосомных аберраций в SE и в NE компоненте CT (Van Echten-Arends et al., 1995; Haddad et al., 1988) свидетельствуют в пользу последней модели. Недавно выдвинутая гипотеза о том, что на каждой стадии развития TGCT может происходить перепрограммирование клеток CIS или семиномы в полипонентные эмбриональные раковые клетки, являющиеся стволовыми клетками несеминомных опухолей, (Oosterhuis et al., 1997) также не противоречит второй модели. Высказывается предположение, что шанс перепрограммирования CIS и SE в NS уменьшается с возрастом, что объясняет факт клинического проявления несеминомных опухолей в более раннем возрасте по сравнению с семиномами (Oosterhuis, Castedo et al., 1989).

Хромосомная конституция

Методом проточной цитометрии было показано, что TGCT представляют собой анеуплоидные клетки, причем клетки SE гипертриплоидны, а клетки NS - гипотриплоидны (Oosterhuis, Castedo et al., 1989; Fossе et al., 1991; el-Naggar et al., 1992). Механизм полиплодидизации в данном случае отличается от такового, описанного для большинства раковых клеток, которые развиваются согласно модели опухолевой прогрессии, предложенной Nowell (Nowell 1976; Nowell 1986). Эта модель описывает клональную эволюцию популяции опухолевых клеток, начинающуюся с диплоидных клеток, которые развиваются в сторону увеличения числа наборов хромосом. В случае же TGCT этот механизм состоит в полиплоидизации с последуюими локальными потерями хромосомного материала. Предрасположенность клеток TGCT к полиплоидизации может быть связана с их происхождением из первичных половых клеток. Эти клетки могут быть особенно склонны к полиплоидизации, поскольку они обладают высокой митотической активностью и тенденцией к образованию мехромосомных мостов. Известно, что патогенгез TGCT включает определенный механизм образования хромосомных мостов (Gondos 1993).

Полиплоидизация с последующими локальными потерями хромосом в TGCT в результате дают специфический паттерн хромосомных наборов, который выявляется кариотипированием (De Jong et al., 1990; Castedo et al., 1989; Van Echten-Arends et al., 1995). Эти исследования показали, что на фоне триплоидного индекса ДНК в клетках SE и NS имеется избыток хромосом 7, 8, 12 и Х при недостатке хромосом 11, 13, 18 и Y. Другими часто встречающимися хромосомными аномалиями являются потери хромосом 4, 5 и 9, избыток хромосомы 21. С меньшей частотой (< 20%) встречаются делеции или аберрации в районах 1p21-26; 6q14-25; 7q11-q36 и 12q12-24 (Murty and Chaganti 1998). Однако, эти хромосомные аберрации с одной стороны не всегда обнаруживаются в данных типах опухолей, а с другой - обнаруживаются в других опухолях, указывая на то, что эти события имеют отношение к опухолевой прогрессии. Несмотря на то, что в SE и NS обнаруживаются однотипные хромосомные пересторойки, специфической чертой SE является значительно большее, чем в NS число копий хромосом 7, 15, 19 и 22, наряду с уменьшенным числом копий хромосомы 17 (Van Echten-Arends et al., 1995).

Другой отличительной чертой TGCT является сверхпредствленость короткого плеча хромосомы 12, наблюдаемая в большинстве случаев в виде изохромосомы i (12p; рис. 4). Данная изохромосома была впервые описана в 1982 г. (Atkin and Baker 1982). Она обычно обнаруживается в 80% TGCT (De Jong, Oosterhuis et al., 1990). Общность происхождения обоих хромосомных плечей (Sinke et al., 1993) говорит в пользу преположения, что i (12p) хромосома скорее образовалась в результате неправильного деления центромеры, чем как результат не-сестринского хроматидного обмена (Mukherjee et al., 1991). Несмотря на то, что в клетках TGCT всегда присутствуют аберрации 12p, образованию i хромосомы всегда предшествует полиплоидизация. Доказательством этого служит сохранение гетерозиготности по 12p в i-позитивных TGCT (Geurts van Kessel et al., 1989).

Идея о том, что сверхпредставленность короткого плеча хромосомы 12 играет важную роль в развитиии TGCT была подтверждена гибридизацией in situ (Suijkerbuijk et al., 1993; Samaniego et al., 1990). Показано также, что сверхпредставленность 12p наблюдается и в i-негативных TGCT.

Данные кариотипирования. представленные выше получили дальнейшее подтверждение недавними экспериментами с использованием CGH-технологии (Korn et al., 1996; Mostert et al., 1996; Ottesen et al., 1997; Summersgill et al., 1998; Rosenberg et al., 1999).

Более того, амплификация определенной области короткого плеча хромосомы 12 в семиномных метастазах (Suijkerbuijk et al., 1994).

Протоонкогены и супрессорные гены

Молекулярные исследования TGCT находятся в начальной стадии. Для болучения большей информации о возможной роли супрессорных генов, во многих исследованиях проводился анализ потери гетерозиготности (LOH). Несмотря на то, что получены не всегда согласующиеся данные, в части исследований подтвердились результаты. полученные с помощью цитогенетических методов, т.е., делеции областей, включающих район 1p (Mathew et al., 1994), 5q (Peng et al., 1995; Murty et al., 1994; Peng et al., 1999) and 12q (Murty et al., 1992).

Обнаружены также горячие точки делеций, включающие генs DCC (18q21) и RB1 (13q14) (Murty et al., 1994). Аберрации других протоонкогенов и супрессорных генов в TGCT встречаются редко: MYC (c-MYC; 8q24, N-MYC; 2p24), c-KIT (4q11-12) и P53 (17p13) (Lothe et al., 1995), K-RAS (12p12) (Dmitrovsky et al., 1990) и NME1 (17q22) (Schmidt et al., 1997).

На уровне РНК обнаружено увеличение экспрессии таких проктоонкогенов как: c-KIT (Rajpert-De Meyts and Skakkebжk 1994; Strohmeyer et al., 1995), N-MYC, c-MOS (Shuin et al., 1994), циклин D2 and K- или N-RAS (Houldsworth et al., 1997; Houldsworth et al., 1997). Обнаружено также снижение или отсутствие экспресии таких онкогенов как: RB, DCC (Murty, Li et al., 1994), INT-2 (Shimogaki et al., 1993; Yoshida et al., 1988) и c-eERB-1 и 2 (Shuin, Misaki et al., 1994).

Поскольку за единственным исключением (Murty et al., 1994) в данных типах опухолей не было обнаружено нестабильности микросателлитных последовательностей, считается. что дефекты репарации генов не играют роли в пргрессии TGCT (Lothe, Peltomaeki et al., 1995).

Семйные случаи TGCT

Эпидемиологические исследования и анализ сцепления позволяют предположить, что треть пациентов с TGCT характеризуется генетической предрасположенностью (Nicholson and Harland 1995). В нескольких исследованиях делались попытки идентифицировать районы хромосом, несущие чувствительные гены. Анализ сцепления проведенный в 50 семьях с использованием 221 маркера (Leahy et al., 1995) показал, что такими районами могут являться определенные области хромосом 1, 4 (2 области), 5, 14 и 18. Сравнение полученных результов с данными представленными International Testicular Cancer Linkage Consortium позволяет предположить, что данные гены вероятно локализуются в хромосомах 3. 5. 12 и 18. К сожалению, не имеется данных о локализации генов предрасположенности, что может объясняться генетической гетерогенностью (действие разных генов проводит к одному конечному результату).

Герминогенные опухоли людей старшего возраста

Третий типом герминогенных опухолей, диагносцируемом в яичке является сперматоцитная семинома (SS), как правило обнаруживаемая у мужчин старше 50-и лет. Подобные опухоли никогда не возникают во внегонадных сайтах и в большинстве случаев прогноз благоприятный (Talerman 1980; Burke and Mostofi 1993). Фенотипически SS характеризуются клеточной гетерогенностью. Морфологически они могут напоминать SE (Talerman 1980). В отличае от SE, SS являются производными более дифференцированных клеток, а именно, B сперматогониев B (Masson 1946; Romanenko and Persidskii 1983; Rosai et al., 1969). Как правило в случае SS в прилежащей паренхиме не обнаруживается преинвазивных опухолей (CIS), хотя наличие интратубулярных SS предполагает, что их предшественником являются преинвазивные опухоли (Muller et al., 1987).

Считается, что SS развиваются незаисимо, хотя на этот счет имеются некоторые сомнения. Основываясь на данных о том, что 40% SS является c-KIT позитивными, высказывается предположение, что по крайней мере некоторые из данных опухолей ведут свое начало от первичных половых клеток (Kraggerud et al., 1999). Иммуногистохимический анализ с использованием PLAP показал гистологические отличия SS от других опухолевых клеток. В этих эксперментах SS характеризовались как негативные, в то время как другие герминогенные опухоли были позитивными (Manivel et al., 1987). Методом прточной цитометрии было показано. что клетки SS могут быть как диплоидными. так и анеуплоидными (Takahashi 1993). Поскольку данный тип опухолей является редким (0.2 на 100.000; Burke and Mostofi 1993), сведения об их хромосомной конституции очень скудны.

Первые данные о хромосомной конституции SS были получены в 1973 г, когда были описаны 2 случая с 52 и 82 хромосомами соответственно (Atkin 1973). Результаты более поздних работ по определению плоидности данных типов клеток с использованием разных методов дали противоречивые результаты (Talerman et al., 1984; Dekker et al., 1992; Takahashi 1993; Looijenga et al., 1994). В наших работах была впервые описана кариограмма SS клеток, показывающая их анеуплоидность и небольшое количество структурных аберраций (Rosenberg et al., 1998). Исследования нашего экспериментального материала а также трех других образцов, включая билатеральные опухоли, с использованием CGH- технологии показали, что единственной специфической особенностью SS является сверхпредставленность хромосомы 9 (Rosenberg, Mostert et al., 1998). Возможно, что относительная доброкачественность данного типа опухолей связана с тем, что наблюдаемый хромосомный дисбаланс связан с целыми хромосомами. Гибридизацией in situ с пробами специфичными для X и Y хромосомы была показана гетерогенность популяций опухолевых клеток. Видимо, это связано с тем, что гистологически эти опухоли представлены мелкими, средними и крупными клетками (Burke and Mostofi 1993; Cummings et al., 1994; Eble 1994; Looijenga, Olie et al., 1994). в каких взаимоотношениях находятся эти клеточные типы пока не установлено. Предполагается, что в этом отношении метод микродиссекций и CGH могут быть весьма перспективными (Looijenga et al., 1999).

Предполагается, что SS происходят из сперматгониев B (Masson 1946; Rosai et al., 1969; Romanenko and Persidskii 1983). Обнаружение одинаковых хромосомных аномалий в билатеральных SS ставит под сомнение это предположение. в качестве объяснения обнаруженным сходствам предлагается предположения о мутациях клеток зародышевых линий (de novo, или семейных), или о наличии метастазов. Оба предположения представляются маловероятными, поскольку семейные случаи SS не известны, метастазирования чистых SS также никогда не обнаруживалось. Недавно появившаяся новая гипотеза связана с обнаружением в SS клетках c-KIT (SCF) белка, который является маркером первичных половых клеток (Manova and Bachvarova 1991). Этот рецептор также был обнаружен в CIS и SE (Strohmeyer et al., 1991; Strohmeyer et al., 1995). Предполагается, что по крайней мере часть SS ведет свое происхождение от первичных (примордиальных) половых клеток (Kraggerud et al., 1999), в которых мутации происходят до их миграции в гонадные зачатки. Эти разные модели могут также служить объяснением присутствия аналогичных хромосомных аберраций в билатеральных SS. Анализ уровней генной экспресии и особенностей мейоза могут быть информативными в данном случае.

Патогенетическое родство

Считается, что SS берут свое начало не от CIS, а от первичных (прмордиальных) половых клеток. Дискуссия по поводу общего или независимого патогенеза GCTI и TGCT от части связана с обнаружением CIS-подобных клеток в прилежащей паренхиме GCTI. Существует описание двух случаев, в которых предположение о присутствии данных клеток строится на данных о PLAP-позитивности и морфологии (Jacobsen 1992). Эти данные критикуются другими авторами (Parkinson and Ramani 1993). Следует отметить, что иммуногистохимический подход не может быть использован для идентификации CIS клеток в паренхиме яичка на первом году жизни, т.к. нормальная паренхима может содержать PLAP-позитивные половые клетки-предшественники (Jшrgensen et al., 1993). Общий патогенетический путь для GCTI и TGCT представляется маловероятным также и в связи с их разной плоидностью.

В тоже время, имеются указания на то, что опухоли желточного мешка яичка детей могут содержать дополнительные копии 12p (Stock, Ambros et al., 1995; Jenderny et al., 1996), и даже i (12p) хромосому, которая детектируется с помощью FISH-методики (Stock, Ambros et al., 1995). Правда, последний результат не подтверждается кариотипированием (Perlman, Cushing et al., 1994). На нашей небольшой выборке мы также не обнаружили присутствия экстра копий 12p. Мы действительно показали наличие в трех из пяти опухолях желточного мешка дополнительных фрагментов 12p, но эти фрагменты отличались от тех, которые обнаруживаются в TGCT. Мы предполагаем, что в ряде случаев обнаружения опухолей с i (12p) у детей речь идет об опухолях взрослого типа у мальчиков с ранним половым созреванием.

Дополнительными свидетельствами в пользу независимого патогенеза GCTI и TGCT являются данные эпидемиологических и иммуногистохимических исследований. В отличае от TGCT, подъема частоты GCTI не наблюдается. В то время как P53 белок обнаруживается в клетках TGCT (Schenkman et al., 1995; Guillou et al., 1996), он не детектируется в GCTI клетках.

Описаны животные модели GCTI и TGCT. Тератокарциномы мыши вероятнее всего передставляют модель GCTI (Walt et al., 1993), демонстрируя ту же , способность пргрессировать в опухоли желточного мешка (van Berlo et al., 1990). Семиномы собак вероятнее всего представляют модель SS опухолей человека (Looijenga, Olie et al., 1994). Отсутствие животных моделей TGCT подчеркивает специфичность данного типа опухолей для человека.

Таким образом, представленные данные подтверждают независимые генетические пути GCTI, TGCT и SS.

Амплификация 12p в TGCT

Данные кариотипирования, FISH- и CGH-анализов показывают наличие в TGCT дополнительных доз целого короткого плеча хромосомы 12. В большинстве случаев это событие детектируется как присутствие i(12p). FISH- аназиз с использованием центромеро-специфической пробы в качестве гибридизационного зонда считается подходящим методом для детектирования i(12p) в интерфазном ядре (Mukherjee et al., 1991; Rodriquez et al., 1992). Хотя согласно нашим данным этот метод не является достаточно надежным, он может быть усовершенствован дополнительным применением FISH с двумя гибридизационными пробами, специфичными к центромере и к короткому плечу хромосомы 12. Для этих целей могут быть также успешно использованы цветные зонды, специфичные к короткому и длинному плечу хромосомы 12 (Blough et al., 1997; Blough et al., 1998).

Хотя образование изохромосомы 12 и не является первой стадией патогенеза TGCT (Geurts van Kessel et al., 1989), постоянное присутствие этих структур в клетках инвазивных опухолей указывает на то, что присутствие экстра копий генов расположенных в коротком плече хромосомы 12 играет важную роль в развитии этого типа опухолей. Идентифицировать гены, вовлеченные в этот процесс очень трудно, поскольку размер короткого плеча составляет 40 Mb, и оно содержит 2000 - 4500 генов (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genemap). Нами, а также рядом других авторов были описаны TGCT опухоли, в клетках которых обнаруживались амплификации ограниченных районов 12p (Suijkerbuijk et al., 1994; Korn, Olde Weghuis et al., 1996; Mostert, Van de Pol et al., ). Можно предположить, что если важные с точки зрения развития рака гены распологаются в амплифицируемом районе, то изучение TGCT с такими амплификациями и без них может пролить свет на биологическую роль экстра дозы 12p в развитии TGCT. С этой целью мы исследовали амплификацию 12p в ряде TGCT опухолей. Данная амплификация была обнаружена в 8% случаев, в основном в SE. Следует также отметить, что в клетках с амплификацией не обнаруживались i хромосомы. Данный факт указывает на то, что существуют два альтернативных механизма приобретения дополнительных копий 12p. которые связаны с биологией данных опухолей.

FISH- анализ показал. что наличие 12p амплификации ассоциировано с инвазивным ростом. Показано наличие 12p амплификации в инвазивных опухолях, микро-инвазивных клетках SE, но не в CIS. Присутствие данной хромосомной аберрации практически во всех SE указывает на два возможных в этих случаях пути развития - рост или ингибирование апоптоза. Последняя воможность подтверждена с помощью ДНК-фингерпринтинга (Olie et al., 1996) и анализом выживаемости клеток in vitro. Следует отметить. что SE с амплификацией 12p возникают в более раннем возрасте. Корреляции с клинической стадией болезни и с результативностью лечения отмечено не было. Амплификация 12p не имеет прогностического значения для NS.

Несмотря на то, что описана достаточно большая серия TGCT с амплификациями 12p, наименьшая зона перекрытия амплификаций (SHROA), осталась в прежних пределах. Похоже, что точки разрывов ампликонов кластерируются в определенных местах, предполагая вовлеченность многих генов в этот процесс. К настоящемку моменту в зоне SHROA картированы три гена: SOX5, JAW1 и KRAS2. Мы предполагаем, что наиболее вероятным кандидатом является ген KRAS2 (Olie et al., 1995). Мутации KRAS2 также не имеют прогностического значения.

Дальнейшие перспективы

Многие вопросы до сих про не решены. это касается раннего развития и, в особенности, генов вовлеченных в процесс образования герминогенных опухолей. Исследования семей с предрасположенностью к определенномку типу рака представляется весьма многообещающим для выяснения молекулярных механизмов. В случае TGCT генетическая предрасположенность выявлена у 25-33% больных (Nicholson and Harland 1995). Поиск генов предрасположенности в опухолях этих больных показал. что наиболее вероятными местами их локализации являются хромосомы 3, 5, 12 и 18 (Leahy et al., 1995). Несомненно, предположение о существовании генов предрасположенности требует проведения более обширного семейного анализа. если окажется, что идентифицированные гены являются опухолевыми супрессорами, то результаты этих исследований должны быть сопоставлены с данными LOH-анализа (Murty et al., 1994; Peng et al., 1999).

Биологическое значение присутствия экстра копий генов 12p в развитии TGCT остается пока невыясненной. В этой связи интересными представляются исследования малого числа копий 12p в CIS, и их возможного увеличения в процессе инвазивного роста. Окончательное решение этоой проблемы будет достигнуто с развитием новых методов исследования in vitro и созданием подходящих животных моделей.

Литература.

Atkin, NB (1973). "High chromosome numbers of seminomata and malignant teratomata of the testis: a review of data on 103 tumours." Britisch Journal of Cancer 28:275-279.

Atkin, NB, and MC Baker (1982). "Specific chromosome change, i(12p), in testicular tumours?" Lancet 8311:1340.

Blough, RI, NA Heerema, P Albers, and RS Foster (1998). "Fluorescence in situ hybridization on nuclei from paraffin-embedded tissue in low stage pure embryonal carcinoma of the testis." J Urol 159:240-244.

Blough, RI, TA Smolarek, TM Ulbright, and NA Heerema (1997). "Bicolor fluorescence in situ hyrbridization on nuclei from formalin-fixed, paraffin-embedded testicular germ cell tumors: comparison with standard metaphase analysis." Cancer Genet Cytogenet 94:79-84.

Bokemeyer, C, and HJ Schmoll (1995). "Treatment of testicular cancer and the development of secondary malignancies." Journal of Clinical.Oncology 13:283-292.

Burke, AP, and FK Mostofi (1988). "Intratubular malignant germ cells in testicular biopties: clinical course and identification by staining for placental alkaline phosphatase." Modern Pathology 1:475-479.

Burke, AP, and FK Mostofi (1993). "Spermatocytic seminoma. A clinicopathologic study of 79 cases." Journal of Urologic Pathology 1:21-32.

Bussey, KJ, HJ Lawce, SB Olson, DC Arthur, DK Kalousek, M Krailo, R Giller, S Heifetz, R Womer, and RE Magenis (1999). "Chromosome abnormalities of eighty-one pediatric germ cell tumors: sex- , age-, site-, and histopathology-related differences--a Children's Cancer Group study." Genes Chromosom & Cancer 25:134-46.

Castedo, SM, B De Jong, JW Oosterhuis, R Seruca, VJ Idenburg, A Dam, G te Meerman, HS Koops, and DT Sleijfer (1989). "Chromosomal changes in human primary testicular nonseminomatous germ cell tumors." Cancer Res. 49:5696-5701.

Cummings, OW, TM Ulbright, JN Eble, and LM Roth (1994). "Spermatocytic seminoma: an immunohistochemical study." Hum Pathol 25:54-59.

De Jong, B, JW Oosterhuis, SMMJ Castedo, A Vos, and GJ Te Meerman (1990). "Pathogenesis of adult testicular germ cell tumors: A cytogenetic model." Cancer Genet Cytogenet 48:143-167.

Dekker, I, T Rozeboom, J Delemarre, A Dam, and JW Oosterhuis (1992). "Placental-like alkaline phosphatase and DNA flow cytometry in spermatocytic seminoma." Cancer 69:993-996.

Dieckmann, KP, and V Loy (1993). "Testicular intraepithelial neoplasia: The precursor of testicular germ cell tumors." Onkologie. 16:61-68.

Dmitrovsky, E, GJ Bosl, and RSK Chaganti (1990). "Clinical and genetic features of human germ cell cancer." Cancer Surv. 9:369-389.

Eble, JN (1994). "Spermatocytic seminoma." Hum Pathol 25:1035-1042.

el-Naggar, AK, JY Ro, D McLemore, AG Ayala, and JG Batsakis (1992). "DNA ploidy in testicular germ cell neoplasms. Histogenetic and clinical implications." Am J Surg Pathol 16:611-8.

Fossa, SD, JM Nesland, EO Pettersen, O Amellem, H Waehre, and K Heimdal (1991). "DNA ploidy in primary testicular cancer." Br J Cancer 64:948-952.

Geurts van Kessel, A, E Van Drunen, B De Jong, JW Oosterhuis, A Langeveld, and MP Mulder (1989). "Chromosome 12q heterozygosity is retained in i(12p)-positive testicular germ cell tumor cells." Cancer Genet Cytogenet 40:129-134.

Giwercman, A, H Von der Maase, and NE Skakkeb?k (1993). "Epidemiological and clinical aspects of carcinoma in situ of the testis." European Urology 23:104-114.

Gondos, B (1993). "Ultrastructure of developing and malignant germ cells." European Urology 23:68-75.

Gonzalez-Crussi, F (1982). Extragonadal teratomas. Washington, Armed Forces Institute of Pathology.

Guillou, L, A Estreicher, P Chaubert, J Hurlimann, AM Kurt, G Metthez, R Iggo, AC Gray, P Jichlinski, and J Benhattar (1996). "Germ cell tumors of the testis overexpress wild-type p53." Am J Pathol 149:1221-1228.

Haddad, FS, PM Sorini, AA Somsin, MH Nathan, RM Dobbs, CS Berger, and AA Sandberg (1988). "Familial double testicular tumors: identical chromosome changes in seminoma and embryonal carcinoma of the same testis." J Urol 139:748-50.

Harms, D, and U Janig (1986). "Germ cell tumours of childhood. Report of 170 cases including 59 pure and partial yolk-sac tumours." Virchows Arch Pathol Anat 409:223-239.

Henderson, BE, L Bernstein, RK Ross, RH Depue, and HL Judd (1988). "The early in utero oestrogen and testosterone environment of blacks and whites: potential effects on male offspring." Br J Cancer 57:216-8.

Haupt, Y, R Maya, A Kazaz, and M Oren (1997). "Mdm2 promotes the rapid degradation of p53." Nature 387:296-9.

Hoffner, L, R Deka, A Chakravarti, and U Surti (1994). "Cytogenetics and origins of pediatric germ cell tumors." Cancer Genet Cytogenet 74:54-58.

Houldsworth, J, V Reuter, GJ Bosl, and RS Chaganti (1997). "Aberrant expression of cyclin D2 is an early event in human male germ cell tumorigenesis." Cell Growth Differ 8:293-9.

Houldsworth, J, V Reuter, GJ Bosl, and RSK Chaganti (1997). "Aberrant expression of cyclin D2 is an early event in human male germ cell tumorigenesis." Cell Growth & Developm 8:293-299.

Jacobsen, GK (1992). "A fetal testis with intratubular germ cell neoplasia (ITGCN)." Modern Pathology 5:547-549.

Jorgensen, N, A Giwercman, J Muller, and NE Skakkeb?k (1993). "Immunohistochemical markers of carcinoma in situ of the testis also expressed in normal infantile germ cells." Histopathol 22:373-378.

Jenderny, J, E Koester, A Meyer, O Borchers, W Grote, D Harms, and U Jaenig (1995). "Detection of chromosome aberrations in paraffin sections of seven gonadal yolk sac tumors of childhood." Hum Genet 96:644-650.

Jenderny, J, E Koester, O Borchers, A Meyer, W Grote, D Harms, and U Jaenig (1996). "Interphase cytogenetics on paraffin sections of paediatric extragonadal yolk sac tumours." Virch Arch Int J Pathol 428:53-57.

Kaplan, CG, FB Askin, and K Benirschke (1979). "Cytogenetics of extragonadal tumors." Teratology 19:261-266.

Kommoss, F, M Bibbo, and A Talerman (1990). "Nuclear deoxyribonucleic acid content (ploidy) of endodermal sinus (yolk sac) tumor." Lab Invest. 62:223-231.

Korn, MW, DEM Olde Weghuis, RF Suijkerbuijk, U Schmidt, T Otto, S Du Manoir, A Geurts van Kessel, S Seeber, and R Becher (1996). "Detection of chromosomal DNA gains and losses in testicular germ cell tumors by comparative genomic hybridization." Genes Chromosom & Cancer 17:78-87.

Kraggerud, SM, A Berner, M Bryne, EO Pettersen, and SD Fossa (1999). "Spermatocytic seminoma as compared to classical seminoma: an immunohistochemical and DNA flow cytometric study." Apmis 107:297-302.

Lane, DP, and PA Hall (1997). "MDM2--arbiter of p53's destruction." Trends Biochem Sci 22:372-4.

Leahy, MG, S Tonks, JH Moses, AR Brett, R Huddart, D Forman, RTD Oliver, DT Bishop, and JG Bodmer (1995). "Candidate regions for a testicular cancer susceptibility gene." Hum Mol Genet 4:1551-1555.

Looijenga, LHJ, RA Olie, I Van der Gaag, FJ van Sluijs, J Matoska, J Ploem-Zaaijer, C Knepfle, and JW Oosterhuis (1994). "Seminomas of the canine testis; counterpart of spermatocytic seminoma of men?" Lab Invest 71:490-496.

Looijenga, LHJ, Oosterhuis J.W. (1999). "Pathogenesis of testicular germ cell tumors." Rev of Reproduction 4:90-100.

Lothe, RA, P Peltomaeki, N Tommerup, SD Fossa, AE Stenwig, AL Borresen, and JM Nesland (1995). "Molecular genetic changes in human male germ cell tumors." Lab Invest 73:606-614.

Manivel, JC, J Jessurun, MR Wick, and LP Dehner (1987). "Placental alkaline phosphatase immunoreactivity in testicular germ-cell neoplasms." Am J Surg Pathol 11(1):21-29.

Manova, K, and R Bachvarova (1991). "Expression of c-kit encoded at the W locus of mice in developing embryonic germ cells and presumptive melanoblast." Developmental Biology 146:312-324.

Masson, P (1946). "Etude sur le seminome." Rev Cancer Biol 5:361-387.

Mathew, S, VVVS Murty, GJ Bosl, and RSK Chaganti (1994). "Loss of heterozygosity identifies multiple sites of allelic deletions on chromosome 1 in human male germ cell tumors." Cancer Researchs 54:6265-6269.

Mostofi FK, Sesterhenn IA, Sobin LH. Histological typing of testis tumours, second edition, Springer, Berlin, 1998.

Midgley, CA, and DP Lane (1997). "p53 protein stability in tumour cells is not determined by mutation but is dependent on Mdm2 binding." Oncogene 15:1179-89.

Mostert, MMC, M Van de Pol, D Olde Weghuis, RF Suijkerbuijk, A Geurts van Kessel, J Van Echten-Arends, JW Oosterhuis, and LHJ Looijenga (1996). "Comparative genomic hybridization of germ cell tumors of the adult testis; confirmation of karyotypic findings and identification of a 12p-amplicon." Cancer Genet Cytogenet 89:146-152.

Mukherjee, AB, VVVS Murty, E Rodriquez, VE Reuter, GJ Bosl, and RSK Chaganti (1991). "Detection and analysis of origin of i(12p), a diagnostic marker of human male germ cell tumors by fluorescent in situ hybridization." Genes Chromosom Cancer 3:300-307.

Muller, J, NE Skakkebaek, and MC Parkinson (1987). "The spermatocytic seminoma: views on pathogenesis." Int J Androl 10:147-56.

Murty, VVVS, GJ Bosl, J Houldsworth, M Meyers, AB Mukherjee, V Reuter, and RSK Chaganti (1994). "Allelic loss and somatic differentiation in human male germ cell tumors." Oncogene 9:2245-2251.

Murty, VVVS, and RSK Chaganti (1998). "A genetic perspective of male germ cell tumors." Semin Oncol 25:133-144.

Murty, VVVS, J Houldsworth, S Baldwin, V Reuter, W Hunziker, P Besmer, G Bosl, and RSK Chaganti (1992). "Allelic deletions in the long arm of chromosome 12 identify sites of candidate tumor suppressor genes in male germ cell tumors." Proc Natl Acad Sci USA 89:11006-11010.

Murty, VVVS, RG Li, J Houldsworth, DL Bronson, VE Reuter, GJ Bosl, and RSK Chaganti (1994). "Frequent allelic deletions and loss of expression characterize the DCC gene in male germ cell tumors." Oncogene 9:3227-3231.

Murty, VVVS, RG Li, S Mathew, VE Reuter, DL Bronson, GJ Bosl, and RSK Chaganti (1994). "Replication error-type genetic instability at 1q42-43 in human male germ cell tumors." Cancer Researchs 54:3983-3985.

Nicholson, PW, and SJ Harland (1995). "Inheritance and testicular cancer." Britisch Journal of Cancer 71:421-426.

Nowell, PC (1976). "The clonal evolution of tumor cell populations." Science 194:23-28.

Nowell, PC (1986). "Mechanisms of tumor progression." Cancer Res. 46:2203-2207.

Olie, RA, AWM Boersman, MC Dekker, K Nooter, LHJ Looijenga, and JW Oosterhuis (1996). "Apoptosis of human seminoma cells upon disruption of their micro-environment." Brit J Cancer 73:1031-1036.

Olie, RA, LHJ Looijenga, L Boerrigter, B Top, S Rodenhuis, MP Mulder, and JW Oosterhuis (1995). "N- and KRAS mutations in human testicular germ cell tumors: incidence and possible biological implications." Genes Chromosom & Cancer 12:110-116.

Oliver, RTD (1987). "HLA phenotype and clinicopathological behaviour of germ cell tumours: possible evidence for clonal evolution from seminomas to nonseminomas." Int J Androl 10:85-93.

Oosterhuis, JW, SM Castedo, B de Jong, CJ Cornelisse, A Dam, DT Sleijfer, and H Schraffordt Koops (1989). "Ploidy of primary germ cell tumors of the testis. Pathogenetic and clinical relevance." Lab Invest 60:14-21.

Oosterhuis, JW, SMMJ Castedo, B De Jong, CJ Cornelisse, A Dam, DT Sleijfer, and H Schraffordt Koops (1989). "Ploidy of primary germ cell tumors of the testis. Pathogenetic and clinical relevance." Lab Invest 60:14-20.

Oosterhuis, JW, SMMJ Castedo, B De Jong, R Seruca, J Buist, H Schraffordt Koops, and JB Leeuw (1988). "Karyotyping and DNA flow cytometry of an orchidoblastoma." Cancer Genet Cytogenet 36:7-11.

Oosterhuis, JW, B De Jong, E Dmitrovsky, and LHJ Looijenga (1997). Testicular Germ Cell Tumors. Molecular Biology and Genetics. Principles and Practice of Genitourinary Oncology. D. Raghavan, H. I. Scher, S. A. Leibel and P. Lange. Philadelphia, Lippincott-Raven Publishers: 631-642.

Oosterhuis, JW, RJ Van Berlo, B De Jong, A Dam, J Buist, RYJ Tamminga, and RP Zwierstra (1993). "Sacral teratoma with late recurrence of yolk sac tumor: human counterpart of embryo- or yolk sac-derived teratoma?" J Urol Pathol 1:257-267.

Ottesen, AM, M Kirchhoff, E Rajpert De-Meyts, J Maahr, T Gerdes, H Rose, C Lundsteen, P Meidahl Petersen, J Philip, and NE Skakkeb?k (1997). "Detection of chromosomal aberrations in seminomatous germ cell tumours using comparative genomic hybridization." Genes Chromosom & Cancer 20:412-418.

Parkinson, MC, and P Ramani (1993). "Intratubular germ cell neoplasia in an infantile testis." Histopathology 23:99.

Peng, HQ, L Liu, PE Goss, D Bailey, and D Hogg (1999). "Chromosomal deletions occur in restricted regions of 5q in testicular germ cell cancer." Oncogene 18:3277-83.

Perlman, EJ, B Cushing, E Hawkins, and CA Griffin (1994). "Cytogenetic analysis of childhood endodermal sinus tumors: a Pediatric Oncology Group study." Pediatr Pathol 14:695-708.

Perlman, EJ, MB Valentine, CA Griffin, and AT Look (1996). "Deletion of 1p36 in childhood endodermal sinus tumors by two-color fluoresence in situ hybridization: a pediatric oncology group study." Genes Chromosom & Cancer 16:15-20.

Prives, C (1998). "Signaling to p53: breaking the MDM2-p53 circuit." Cell 95:5-8.

Rajpert-De Meyts, E, and NE Skakkeb?k (1994). "Expression of the c-kit protein product in carcinoma-in-situ and invasive testicular germ cell tumours." Int J Androl 17:85-92.

Rodriquez, E, S Mathew, AB Mukherjee, VE Reuter, GJ Bosl, and RSK Chaganti (1992). "Analysis of chromosome 12 aneuploidy in interphase cells from male germ cell tumors by fluorescence in situ hybridization." Genes Chromosom Cancer 5:21-29.

Romanenko, AM, and YV Persidskii (1983). "Ultrastructure and histogenesis of spermatocytic seminoma." Voprosi Onkologii 19:61-66.

Rosai, J, K Khodadoust, and I Silber (1969). "Spermatocytic seminoma." Cancer 24:103-116.

Rosenberg, C, T Bakker Schut, MC Mostert, HJ Tanke, AK Raap, JW Oosterhuis, and LHJ Looijenga (1999). "Chromosomal gains and losses in testicular germ cell tumors of adolescents and adults investigated by a modified CGH approach." Lab Invest 79:1447-1451.

Rosenberg, C, MC Mostert, T Bakker Schut, M Van de Pol, J Van Echten-Arends, B De Jong, T Raap, H Tanke, JW Oosterhuis, and LHJ Looijenga (1998). "Chromosomal constitution of human spermatocytic seminomas: comparative genomic hybridization suppored by conventional and interphase cytogenetics." Genes Chromosom & Cancer 23:286-291.

Samaniego, F, E Rodriguez, J Houldsworth, VV Murty, M Ladanyi, KP Lele, QG Chen, E Dmitrovsky, NL Geller, V Reuter, and et al., (1990). "Cytogenetic and molecular analysis of human male germ cell tumors: chromosome 12 abnormalities and gene amplification." Genes Chromosom Cancer 1:289-300.

Schenkman, NS, IA Sesterhenn, L Washington, YA Tong, CM Weghorst, GS Buzard, S Srivastava, and JW Moul (1995). "Increased p53 protein does not correlate to p53 gene mutations in microdissected human testicular germ cell tumors." J Urol 154:617-621.

Schmidt, B, R Ackermann, M Hartmann, and T Strohmeyer (1997). "Alterations of the metastasis suppressor gene nm23 and the proto-oncogene c-myc in human testicular germ cell tumors." J Urol 158:2000-2005.

Scully, RE (1979). Atlas of tumor Pathology. Washington, DC, Armed Forces Institute of Pathology.

Sesterhenn, IA (1985). The role of intratubular malignant germ cells in the histogenesis of germ cell tumors. Proceedings of the 2nd germ cell tumor conference. W. G. Jones, A. Milford Ward and C. K. Anderson. Leeds: 25-35.

Shimogaki, H, S Kitazawa, S Maeda, and S Kamidono (1993). "Variable expression of hst-1, int-1, and parathyroid hormone-related protein in different histolofical types of human testicular germ cell tumors." Cancer Journal 6(2):81-86.

Shuin, T, H Misaki, Y Kuboto, M Yao, and M Hosaka (1994). "Differential expression of protooncogenes in human germ cell tumors of the testis." Cancer 73:1721-1727.

Siebert, R, and K Weber-Matthiesen (1997). "Fluorescence in situ hybridization as a diagnostic tool in malignant lymphomas." Histochem Cell Biol 108:391-402.

Silver, SA, JM Wiley, and EJ Perlman (1994). "DNA ploidy analysis of pediatric germ cell tumors." Mod Pathol 7:951-956.

Sinke, RJ, RF Suijkerbuijk, B De Jong, JW Oosterhuis, and A Geurts van Kessel (1993). "Uniparental origin of i(12p) in human germ cell tumors." Genes Chromosom Cancer 6:161-165.

Skakkebaek, NE, JG Berthelsen, A Giwercman, and J Muller (1987). "Carcinoma-in-situ of the testis: possible origin from gonocytes and precursor of all types of germ cell tumours except spermatocytoma." Int J Androl 10:19-28.

Stock, C, IM Ambros, T Lion, OA Haas, A Zoubek, H Gadner, and PF Ambros (1994). "Detection of numerical and structural chromosome abnormalities in pediatric germ cell tumors by means of interphase cytogenetics." Genes Chromosom & Cancer 11:40-50.

Stock, C, IM Ambros, S Sthehl, A Zubek, FM Fink, H Gadner, and PF Ambros (1995). "Cytogenetic aspects of pediatric germ cell tumors." Klin Padiatr 207:235-241.

Strohmeyer, T, D Reese, M Press, R Ackermann, M Hartmann, and D Slamon (1995). "Expression of the c-kit proto-oncogene and its ligand stem cell factor (SCF) in normal and malignant human testicular tissue." Journal of Urology 153:511-515.

Strohmeyer, T, S Peter, M Hartmann, S Munemitsu, R Ackermann, A Ullrich, and DJ Slamon (1991). "Expression of the hst-1 and c-kit protooncogenes in human testicular germ cell tumors." Cancer Research 51:1811-1816.

Suijkerbuijk, RF, RJ Sinke, AM Meloni, JM Parrington, J van Echten, B De Jong, JW Oosterhuis, AA Sandberg, and A Geurts van Kessel (1993). "Overrepresentation of chromosome 12p sequences and karyotypic evolution in i(12p)-negative testicular germ-cell tumors revealed by fluorescence in situ hybridization." Cancer Genet Cytogenet 70:85-93.

Suijkerbuijk, RF, RJ Sinke, DEM Olde Weghuis, L Roque, A Forus, F Stellink, A Siepman, C Van de Kaa, J Soares, and A Geurts van Kessel (1994). "Amplification of chromosome subregion 12p11.2-p12.1 in a metastatis of an i(12p)-negative seminoma: relationship to tumor progression?" Cancer Genet Cytogenet 78:145-152.

Summersgill, B, H Goker, S Wber-Hall, R Huddart, A Horwich, and J Shipley (1998). "Molecular cytogenetic analysis of adult testicular germ cell tumours and identification of regions of consensus copy number change." Brit J Cancer 77:305-313.

Takahashi, H (1993). "Cytometric analysis of testicular seminoma and spermatocytic seminoma." Acta Pathol Japon 43:121-129.

Talerman, A (1980). "Spermatocytic seminoma." Cancer 45:2169-2176.

Talerman, A, YS Fu, and T Okagaki (1984). "Spermatocytic seminoma. Ultrastructural and microspectrophotometric observations." Lab Invest 51(3):343-349.

Van Berlo, RJ, JW Oosterhuis, E Schrijnemakers, CJF Schoots, B De Jong, and I Damjanov (1990). "Yolk-sac carcinoma develops spontaneously as a late occurrence in slow-growing teratoid tumors produced from transplanted 7-day mouse embryos." International Journal of Cancer 45:153-155.

Van Echten-Arends, J, JW Oosterhuis, LHJ Looijenga, A Dam, DT Sleijfer, H Schraffordt Koops, and B De Jong (1995). "Cytogenetic evidence that the seminoma and nonseminoma component of mixed testicular germ cell tumors may either be monoclonal or polyclonal in origin: report of 3 cases." Modern Pathology in press.

Van Echten-Arends, J, JW Oosterhuis, LHJ Looijenga, J Wiersma, G te Meerman, H Schraffordt Koops, DT Sleijfer, and B De Jong (1995). "No recurrent structural abnormalities in germ cell tumors of the adult testis apart from i(12p)." Genes Chromosom & Cancer 14:133-144.

Van Echten-Arends, J, JW Oosterhuis, LHJ Looijenga, J Wiersma, G te Meerman, H Schraffordt Koops, DT Sleijfer, and B De Jong (1995). "No recurrent structural abnormalities in germ cell tumors of the adult testis apart from i(12p)." Genes Chromosom & Cancer 14:133-144.

Yoshida, T, M Tsutsumi, H Sakamoto, K Miyagawa, S Teshima, T Sugimura, and M Terada (1988). "Expression of the HST1 oncogene in human germ cell tumors." Biochem Biophys Res Commun 155:1324-1329.